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蛋白質純化的原理是什么？

2023-11-30 蛋白純化是指通過基因工程技術將編碼蛋白的核酸序列導入到宿主細胞，使其大量表達，再使用適當的純化方法將其在體外純化出來，從而獲得高純度、活性和產量的蛋白質。蛋白質表達系統可以分為原核表達系統和真核表達系統兩大類。那么你知道蛋白質純化的原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、乳糖操縱子的負調控在沒有乳糖存在時，lac操縱子處于阻遏狀態，此時，I序列表達Lac阻遏蛋白與O序列結合，阻礙RNA聚合酶與P序列結合，抑制轉錄啟動。當有乳糖存在時，乳糖進入細胞，經β-半乳糖苷酶催化，轉變為異...

瓊脂糖凝膠電泳的常見問題有哪些？

2023-11-29 瓊脂糖凝膠電泳是根據核酸（DNA或RNA）分子大小來分離和識別物質的技術。那么你知道瓊脂糖凝膠電泳的常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、同樣大小的DNA一起跑電泳條帶不一樣大DNA條帶不一樣大，本質上是DNA在凝膠中的遷移率不一樣，有的跑得快，有的慢，通常情況同樣大小的DNA，遷移率是一樣的，條帶位置也會一樣。但遷移率也受很多因素影響，例如DNA的構象。例如環狀超螺旋結構的DNA，和同等大小的線性DNA（例如單位點酶切后的質粒），前者的遷移率要高，表現出來就是看上去超螺...

細胞計數通用步驟有什么？有何注意事項？

2023-11-29 細胞計數是指對細胞數量進行定量測定的方法。在細胞培養實驗中，通過細胞計數來確定細胞培養的密度和數量，可以掌握細胞生長的情況。同時，細胞計數也是衡量不同實驗條件下細胞生長情況的重要指標之一。那么你知道細胞計數通用步驟有什么嗎？有何注意事項呢？讓我們一起來看看吧！一、細胞計數的通用方法1.以貼壁生長的細胞為例，消化后的細胞充分重懸吹散，取一部分轉移至干凈的EP管內，例如1mL;2.使用酒精棉球輕輕擦拭計數板表面和蓋玻片，把后者的邊緣微微濕潤，然后小心蓋在計數板的正中間，邊緣要能覆...

你知道什么是緩沖溶液嗎？

2023-11-28 你知道什么是緩沖溶液嗎？讓我們一起來看看吧！緩沖溶液是許多生化反應、生產、實驗過程中的重要溶液，對穩定溶液的酸堿度有重要的影響。最常見的幾種緩沖體系有磷酸鹽緩沖溶液、硼酸鹽緩沖溶液、三羥甲基氨基甲烷（簡稱Tris）-HCl緩沖溶液、羥yi基哌qin乙磺酸（供注射用）（簡稱HEPES）緩沖溶液。對于絕大多數生物制劑（如疫苗、抗體、ADC偶聯藥物、脂質體等）而言，實驗操作、實際生產以及生物體內的生化反應等都需要在特定的pH值范圍內才能正常有效地進行，從而得到準確的實驗結論或發揮最...

如何選擇緩沖溶液？

2023-11-28 三羥甲基氨基甲烷（Tris）是一種應用非常廣泛的有機試劑。它及其衍生物被廣泛應用于生物化學和分子生物學實驗中的緩沖液的制備，可用于制作藥物、有機合成、生物緩沖劑等。其中在生化實驗中，許多蛋白質及核酸相關的實驗都需要用Tris作為生物緩沖劑。那么你知道該如何選擇緩沖溶液嗎？讓我們一起來看看吧！TBS即Tris緩沖鹽水，是Tris-HCl緩沖鹽溶液，為等滲鹽溶液加Tris-HCl緩沖液。因為Tris堿的堿性較強，所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩...

細胞消化的方法有哪些？

2023-11-27 細胞消化的方法有哪些？我們的細胞在培養時大部分會以貼壁的形式生長，它們在機體內時，也是與其他細胞或者細胞外基質結合的。細胞培養過程中使用的wan全培養基中的血清，含有許多帶陽性電荷的促細胞附著因子(層黏連蛋白Laminine、纖維連接蛋白Fibronectin等胞外基質），能幫助細胞附著于帶陰性電荷的底物上，并形成連接、貼壁伸展。使細胞解除這種附著，就是細胞消化。那么你知道細胞消化的方法有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、機械消化法直接用培養基吹打或使用細胞刮刀，通過外力使細胞...

ELISA檢測時樣本實驗準備步驟有什么？

2023-11-27 在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。那么你知道ELISA檢測時樣本實驗準備步驟都有什么嗎？讓我們一起來看看吧！1.血清室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。2.血漿應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。3.尿液用無菌管收集。離心20分鐘左...

阻斷ELISA與液相阻斷ELISA有什么區別？

2023-11-27 你知道阻斷ELISA與液相阻斷ELISA有什么區別嗎？讓我們一起來看看吧！一、本質不同間接的酶標抗體是二抗，與待檢抗體結合；阻斷酶標抗體是一抗，與抗原結合。間接中底物降解的量與抗體量相等，阻斷底物降解量與抗體。二、實驗結果不同酶聯免疫吸附試驗：是酶免疫測定技術中應用zui廣的技術，其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯微量反應板)表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除，常用的ELISA法有雙抗體夾心法和間接法。OD值不同是因...